实验11 水中总磷含量与富营养化的关系

1、实验目的

目前，水域的富营养化问题已相当严重。水中总磷的含量在很大程度上是决定水体富营养化的关键因子，人类活动是水中P增加的重要原因。磷是评价水质的重要指标。水中的磷根据其存在形式可分为总磷、可溶性正磷酸盐和可溶性总磷酸盐。

2、主要仪器设备

分光光度计、移液管、自动高压灭菌锅、具塞比色管、分析天平、容量瓶、硫酸纸、棕色玻璃瓶。

3、试剂

（1） 氧化剂溶液 5%过硫酸钾溶液，称取5g过硫酸钾，溶于100mL水中。

（2）磷酸盐贮备液 将磷酸二氢钾经105~110^oC干燥两小时，在干燥器中放冷，用万分之一分析天平称取0.2197g用水溶解后，移入1000mL 容量瓶中。加入1:1的硫酸溶液5mL，再用水稀释至1000mL，此溶液为50ug/mL的磷酸盐贮备液。

（3）磷酸盐标准液 吸取10.00mL磷酸盐贮备液溶于250mL容量瓶中，用水稀释至标线。此溶液每毫升含2.00 ug磷。临用时现配。

（4）（1 1）硫酸 量取150mL浓硫酸，缓缓加到150mL蒸馏水中，不断搅拌，冷却。

（5）钼酸铵盐溶液 取钼酸铵13g溶于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至100mL。将0.35g酒石酸锑钾溶于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至100mL。

将钼酸铵溶液徐徐加到300mL（1 1）硫酸中，加酒石酸锑氧钾溶液并混合均匀，贮存在棕色玻璃瓶中4℃保存（此溶液不稳定，宜在使用前配制）。

（6）10%的抗坏血酸：10g抗坏血酸溶于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至100mL，贮存在棕色玻璃瓶中4℃保存（此溶液不稳定，宜在使用前配制）。

（7） 酚酞指示剂：称取0.5g酚酞，溶于50mL 95%乙醇中，用水稀释至100mL。

（8）氢氧化钠溶液（1mol L^-1）将40g氢氧化钠溶于500mL水中，冷至室温，稀释至1000mL。

（9）硫酸溶液（1mol/L） 取800mL水，并于不断搅拌下小心地加入54mL硫酸（p=1.84g /mL）冷至室温并稀释至1000mL。

4、操作步骤

（1）校准曲线的绘制：取数支50mL具塞比色管，分别吸取磷酸盐标准液0，0.50，1.00，3.00，5.00，10.0，15.0mL再分别加入4mL氧化剂溶液摇匀后，加蒸馏水定容至25mL，加盖摇匀，扎紧盖子，放入高压消毒器中，与水样的氧化同时进行。

（2）消解：吸取摇匀后的水样25mL于50mL比色管中，加入4mL氧化剂溶液，加盖后摇匀，扎紧盖子，以防跳出，放入高压消毒器，与标准系列同时在120℃下高压氧化30min，然后冷却至室温慢慢启盖，取出测定。

（3）pH值的调节：分别向标准系列及氧化后的水样中加入1滴酚酞指示剂，滴加氢氧化钠溶液至刚呈微红色，再滴加1mol L^-1硫酸溶液使微红刚好褪去。

（4）显色 分别向调过PH值的标准系列及氧化后的水样中加入1mL 10%的抗坏血酸，混匀。30s后加入2 mL钼酸盐溶液,充分混匀后，放置15min。

（5）总磷的测定 用10mm或30mm比色皿，于700nm波长处，以零浓度溶液为参比，测量吸光度，记录读数。